Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病症状进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现家兔胃溃疡球蛋白到显现1HG心血管疾病病理副作用的重大突破率在孩童时期就有很差的揭示，多个家兔胃溃疡球蛋白阳性的孩童中都有70%在血液变换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的孩童这一比率减小到84%。相较之下，占病理1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的胃癌有助于还没给予充分的学忍术研究。

越来越多的人开始用于分期系统来判别1HG心血管疾病的重大突破：个形体在显现多种家兔胃溃疡球蛋白时带入第1前期，显现血糖异常时带入第2前期，显现副作用时带入第3前期。一些多发家兔胃溃疡球蛋白阳性的个形体，在1期和2期，重大突破较较慢，并发展为胃癌的1HG心血管疾病。我们以前揭示了一三组在首次检测到多种家兔胃溃疡球蛋白样品后将近10年无心血管疾病的亦然较慢重大突破者，这三组病变总人数少，但特征非常明确。随后，我们注意到家兔自身肝细胞免疫CD8+T细胞核质孙子化在重大突破非常较慢的病变中都基本不实际上，但在近期胃癌和或多或少的心血管疾病病变中都很很难检测到。这意味著证明，与重大突破病变相较，这些病变胃溃疡质孙子化的调控增强。

早期学忍术研究证明，尽管调控性T细胞核(Treg)为数正常，但心血管疾病病变实际上一些有助于原因，其中都最主要对IL-2的质孙子化灵活性降低。此外，心血管疾病病变中都的现象CD4+T细胞核意味著对调控更为具抵抗性，表现为现象T细胞核的诱发增强，自然造成的Treg和形粘液造成的作用于Treg，以及肝细胞亲身经历的CD4+T细胞核中都IL-2质孙子化增强。本学忍术研究的目的是揭示了CD4+调控性T细胞核(Treg)在一小群亦然非常较慢重大突破者中都的特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

侧重研究方法：BOX学忍术研究是一项以人群为基础的斜向学忍术研究，在21岁以下患病的病变亲属中都核查1HG心血管疾病的生命危险原因。我们以前揭示了长时间非常较慢重大突破者的特征，他们保持多重家兔胃溃疡球蛋白阳性将近10年，但没显现心血管疾病的病理副作用，较慢性或非顺利进行性胃溃疡。随后，10名继续保持无心血管疾病并愿意提供大量血液样品的非常较慢重大突破者不属于T和B细胞核有助于侧重研究。在现有的学忍术研究中都，8名较慢重大突破者(SP三组)，中都位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的家兔胃溃疡球蛋白阳性。所有的旁观者都受制于1HG心血管疾病重大突破的1期，尽管一些人随后保住了家兔胃溃疡球蛋白对某些肝细胞的阳性质孙子化，然而，一名病变现在受制于2期将近6年，但没显现病理副作用，一名病变被确诊为心血管疾病，该受测者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据侧重研究中都对该供形体顺利进行了另行评估。裂解外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多常量流式细胞核忍术和T细胞核诱发检验评估供形体中都Treg的增益、表现HG和有助于。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、密切相关和紧接著)顺利进行无监督聚类侧重研究，评估Treg表现HG。

结果：与肥胖供形体相较，来自较慢重大突破形体的遗忘CD4+T细胞核的监督聚类辨识，应答的遗忘CD4+ Treg增益减小，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)传达减小有关。一名HbA1c升高的病变与重大突破非常较慢者和匹配的印证三组相较，Treg曲谱有所并不相同。有助于侧重研究证明，与肥胖供形体相较，来自非常较慢重大突破形体的Treg介导的CD4+现象T细胞核诱发明显受到破坏。表现为对现象CD4+T细胞核CD25和CD134传达的诱发减小。

所示1 侧重的表现HG侧重研究辨识，CD4+Treg亚HG在较慢重大突破揭示符中都减小。由FlowSOM生成的Treg三楼，聚集在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物传达鉴别出10个元簇:遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个链表代表者一个战斗群(100个战斗群)，更为大的元战斗群(10个元战斗群)在链表三组四周成品。每个链表中都的碗所示坚称单个上标的传达级别。(b)每个元聚类的热所示，以辨识整形体上标传达。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成所示，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster箱子该线所示(丰度> 0.05%)未确定为HD和SP三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核(l)。橙色橘色代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon三组字母秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模HG证实，Treg增益的减小是重大突破非常较慢的图标。分级除此以外(a - f)和甜菜侧重研究(g-k)非常SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)基因HGCD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表者性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行裂解，模拟器FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(斑点)三组以及供形体SP 606(橙色)中都CD25+ cd127的增益概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外孙邻域的箱子该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达数值着色，箭头值得注意的簇被比对为SP和HD揭示符密切关系的并不相同。(j)箱子该线所示辨识了在SP(斑点)和HD(灰点)三组中都，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较丰度(比率)。(k)直方所示辨识每个簇的表现HG(白色)和Treg上标相较传达与着重传达(橙色);上列，寄存器Treg_3;下面四人，寄存器Treg_4。着重与所有其他簇中都上标的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon三组字母秩检验

所示3 与肥胖献血者相较，重大突破非常较慢者遗忘treg的GITR减小。每个遗忘CD4+T细胞核元簇(遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达上标的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)揭示符的传达热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR传达串联，辨识直方所示(c)和概述所示(d)。Wilcoxon三组字母秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供形体最主要，p< 0.05(橙色)供形体SP 606和匹配的HD不最主要在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)串联，辨识直方所示(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon三组字母秩检验

所示4 来自非常较慢重大突破的CD4+ treg细胞核管控现象CD4+T细胞核的灵活性降低。SP三组用橙色的该线和橘色坚称，HD三组用粉红色的该线和橘色坚称，橙色的该线/橘色坚称供形体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被上标为CFSE, Treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠作用于细胞核，培养3紧接著顺利进行流式细胞核忍术检测。(a-d)与CD4+应答者相较应的treg培养(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱发比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发比例。用于阳性印证(应答的拥护细胞核不含treg)计算诱发比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差侧重研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

所示5 现象CD4+T细胞核对非常较慢重大突破的T细胞核作用于的诱发更为引人注目。SP三组用橙色的该线和橘色坚称，HD三组用粉红色的该线和橘色坚称，橙色的该线/橘色坚称供形体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上标，treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠作用于细胞核，培养3紧接著顺利进行流式细胞核忍术(CD25反染)和细胞核因孙子侧重研究。HD Treg与HD、SP或sp606应答者协同培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱发花红(b)。(c,d) CD25诱发花红(c)和CD134诱发花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差侧重研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

论证：我们得出的论证是，来自非常较慢重大突破孙子的作用于遗忘CD4+Treg在GITR传达中都给予了拓展和非常丰富，强调了进一步学忍术研究Treg在1HG心血管疾病风险个形体中都的值得注意的必要性。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28