Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的反复中逐渐扩展

从第一次显现出呼吸道自身HIV到显现出1改型肾病临床副作用的十分困难百余人在幼儿一时期就有良好的描述，多个呼吸道自身HIVHIV的幼儿里有70%在胰岛素切换后10周内患上肾病，而随访15年的幼儿这一比重上升到84%。相比，占到临床1改型肾病一半以上的改型1改型肾病的发病选择性还没有得到更进一步的深入研究。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1改型肾病的十分困难：有机体在显现出多种呼吸道自身HIV时重回第1阶段，显现出血糖异常时重回第2阶段，显现出副作用时重回第3阶段。一些多发呼吸道自身HIVHIV的有机体，在1期和2期，十分困难较迟，并工业发展为发病的1改型肾病。我们此前描述了一三组在首次探测到多种呼吸道自身HIV试样后数10年无肾病的亦然迟十分困难者，这三组病变人数少，但特征亦然为明确。随后，我们发现呼吸道自身蛋白特异性CD8+T蛋白自由基在十分困难相对迟的病变里基本不存在，但在近期发病和一直存在的肾病病变里很容易探测到。这可能表明，与十分困难病变相比，这些病变化脓性自由基的调节增强。

以前深入研究表明，尽管调节性T蛋白(Treg)为数正常，但肾病病变存在一些功用原因，其里以外对IL-2的自由基能力提高。此外，肾病病变里的波动CD4+T蛋白可能对调节不具抵抗性，展现为波动T蛋白的可抑制西移动，自然导致的Treg和人体内导致的诱导Treg，以及蛋白漫长的CD4+T蛋白里IL-2自由基西移动。本深入研究的目的是描述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群亦然相对迟十分困难者里的特征，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX深入研究是一项以老年人为了将的纵向深入研究，在21岁此表确诊的病变亲属里检查1改型肾病的危险状况。我们此前描述了一直相对迟十分困难者的特征，他们保持多重呼吸道自身HIVHIV将近10年，但没有显现出肾病的临床副作用，迟性或非顺利进行性化脓性。随后，10名继续保持无肾病并愿意透过大量肠道试样的相对迟十分困难者纳入T和B蛋白功用深入研究。在目前的深入研究里，8名迟十分困难者(SP三组)，里位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的呼吸道自身HIVHIV。所有的组织者都始终保持1改型肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失掉了呼吸道自身HIV对某些蛋白的HIV自由基，然而，一名病变已经始终保持2期数6年，但没有显现出临床副作用，一名病变被病人为肾病，该受试者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在深入研究里对该NADP顺利进行了原则上评量。除去外周血单个反应器蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白练成和T蛋白可抑制次测试评量NADP里Treg的阈值、表改型和功用。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重返)顺利进行无指派聚类深入研究，评量Treg表改型。

结果：与生已逝品质NADP相比，来自迟十分困难体的遗忘CD4+T蛋白的指派聚类表明，抑制的遗忘CD4+ Treg阈值上升，与糖皮质激素诱导的TNFR之外蛋白(GITR)暗示上升有关。一名HbA1c升高的病变与十分困难相对迟者和匹配的相异三组相比，Treg谱略有各有不同。功用深入研究表明，与生已逝品质NADP相比，来自相对迟十分困难体的Treg内皮细胞的CD4+波动T蛋白可抑制引人注意毁损。展现为对波动CD4+T蛋白CD25和CD134暗示的可抑制上升。

上图1 险恶的表改型深入研究表明，CD4+Treg亚改型在迟十分困难路由表里上升。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有NADP的已逝CD4+CD45RA -蛋白上。根据标示物暗示鉴定出10个元簇:遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)采用9个各有不同Treg标示填充的10个元簇的MST。每个链表代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在链表三组周围手工。每个链表里的饼上图说明单个标示的暗示层级。(b)每个元聚类的热上图，以表明整体标示暗示。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)填充上图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对原子量为每个metacluster装有两条路3](原子量> 0.05%)已确定为HD和SP三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白(l)。绿色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 采用CITRUS的预测模改型表明，Treg阈值的上升是十分困难相对迟的标志。AO内皮细胞(a - f)和柑桔深入研究(g-k)相对SP组织者和匹配的HD组织者在CD4+CD45RA−T蛋白上的相异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的近现代上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利进行除去，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(环纹)和SP(虎纹)三组以及NADPSP 606(绿色)里CD25+ cd127的阈值汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+内皮细胞长集合的装有两条路3];(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)龙眼簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，圆圈突出的簇被标识为SP和HD路由表间的各有不同。(j)装有两条路3]表明了在SP(虎纹)和HD(灰点)三组里，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对原子量(比重)。(k)直方上图表明每个簇的表改型(深蓝色)和Treg标示相对暗示与背景暗示(紫色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇里标示的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

上图3 与生已逝品质献血者相比，十分困难相对迟者遗忘treg的GITR上升。每个遗忘CD4+T蛋白元簇(遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个暗示标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的暗示热上图(sp606不以外在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR暗示串联，表明直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADP以外，p< 0.05(紫色)NADPSP 606和匹配的HD不以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从AO内皮细胞，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)串联，表明直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

上图4 来自相对迟十分困难的CD4+ treg蛋白控制波动CD4+T蛋白的能力提高。SP三组用紫色的两条路线和格子说明，HD三组用蓝色的两条路线和格子说明，绿色的两条路线/格子说明NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示为CFSE, Treg按检视的比重溶液。用抗CD3 /28微珠激已逝蛋白，培育3天后顺利进行流式蛋白练成探测。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE可抑制平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制平均值。采用HIV相异(抑制的鼓动蛋白不含treg)计算可抑制平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

上图5 波动CD4+T蛋白对相对迟十分困难的T蛋白激已逝的可抑制更敏感。SP三组用紫色的两条路线和格子说明，HD三组用蓝色的两条路线和格子说明，绿色的两条路线/格子说明NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示，treg按检视的比重溶液。用抗CD3 /28微珠激已逝蛋白，培育3天后顺利进行流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因长子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培育。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE可抑制百分百余人(b)。(c,d) CD25可抑制百分百余人(c)和CD134可抑制百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

论证：我们得出论证的论证是，来自相对迟十分困难长子的激已逝遗忘CD4+Treg在GITR暗示里得到了扩展和丰富，特别强调了进一步深入研究Treg在1改型肾病不确定性有机体里的性状的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28