Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者十分困难缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到人体内自身免疫球酶到用到1DF高血压临床征状的的发展率在青少年以前就有很好的刻画，多个人体内自身免疫球酶中性的青少年当则有70%在人体内转换后10年内患上高血压，而随访15年的青少年这一比例增高到84%。相较之下，占临床1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的发病机制还无法得到充分的科学研究。

愈发多的人开始用到仍须系统来下定义1DF高血压的的发展：个体在用到多种人体内自身免疫球酶时踏入第1期中，用到血糖异常时踏入第2期中，用到征状时踏入第3期中。一些多发人体内自身免疫球酶中性的个体，在1期和2期，的发展较太快，并发展为发病的1DF高血压。我们以前刻画了一四组在首次测定到多种人体内自身免疫球酶样本后多于10年无高血压的极太快的发展者，这四组症状人数少，但相似性极为明确。随后，我们找到人体内自身复合物抗原CD8+T细胞膜反应在的发展快速的症状当中整体不起因于，但在更进一步发病和一直起因于的高血压症状当中很较易测定到。这可能暗示，与的发展症状相较，这些症状自身抗原的调节增强。

早期科学研究暗示，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量正常，但高血压症状起因于一些机制不足之处，其当中包括对IL-2的反应潜能降低。此外，高血压症状当中的振荡CD4+T细胞膜可能对调节更具抵抗性，观感为振荡T细胞膜的消除西移动，自然环境产生的Treg和体外产生的作用于Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞膜当中IL-2反应西移动。本科学研究的目的是刻画了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在大群极快速的发展者当中的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法有：BOX科学研究是一项以成年人为基础的纵向科学研究，在21岁表列出确诊的症状直系亲属当中检查1DF高血压的危险因素。我们以前刻画了一直快速的发展者的相似性，他们保持多重人体内自身免疫球酶中性高达10年，但无法用到高血压的临床征状，太快性或非进行性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并愿意共享大量人体内样本的快速的发展者纳入T和B细胞膜机制分析方法。在目前的科学研究当中，8名太快的发展者(SP四组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身免疫球酶中性。所有的大多数人都处于1DF高血压的发展的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身免疫球酶对某些复合物的中性反应，然而，一名症状已经处于2期多于6年，但无法用到临床征状，一名症状被病患为高血压，该患者72岁，在采自实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法当中对该酪氨酸进行了单独评估。分离外周血单个核子细胞膜(PBMCs)，选用多实例流式细胞膜术和T细胞膜消除试验评估酪氨酸当中Treg的增益、表DF和机制。用到FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和重回)进行无监督聚类分析方法，评估Treg表DF。

结果：与健康酪氨酸相较，来自太快的发展体的无意识CD4+T细胞膜的监督聚类看显露，酪氨酸的无意识CD4+ Treg增益增高，与消除作用作用于的TNFR相关酶(GITR)表达显露来增高有关。一名HbA1c上升的症状与的发展快速者和反之亦然的对照四组相较，Treg谱有所多种不同。机制分析方法暗示，与健康酪氨酸相较，来自快速的发展体的Treg酪氨酸的CD4+振荡T细胞膜消除轻微受损。观感为对振荡CD4+T细胞膜CD25和CD134表达显露来的消除增高。

平面图1 深入的表DF分析方法看显露，CD4+Treg亚DF在太快的发展路由表当中增高。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的来生CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上面物表达显露来比对显露10个元簇:无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用到9个多种不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个链表代表人一个一个大(100个一个大)，相当大的元一个大(10个元一个大)在链表四组周围上色。每个链表当中的饼平面图透露单个上面的表达显露来级别。(b)每个元聚类的热平面图，以看显露整体上面表达显露来。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的大块。(e-l)相对稀土元素为每个metacluster装有终点站平面图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞膜(l)。橘色左上角代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用到CITRUS的预测模DF证实，Treg增益的增高是的发展快速的标志。分级门控(a - f)和大豆分析方法(g-k)比较SP大多数人和反之亦然的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表人性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达显露来进行分离，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)四组以及酪氨酸SP 606(橘色)当中CD25+ cd127的增益汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控次集合的装有终点站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达显露来风力着色，箭头突显露的簇被比对为SP和HD路由表之间的多种不同。(j)装有终点站平面图看显露了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组当中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对稀土元素(比例)。(k)直方平面图看显露每个簇的表DF(粉红色)和Treg上面相对表达显露来与背景表达显露来(蓝色);上列，闪存Treg_3;下面一路上，闪存Treg_4。背景与所有其他簇当中上面的表达显露来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与健康献血者相较，的发展快速者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T细胞膜元簇(无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表达显露来上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表达显露来热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表达显露来串联，看显露直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(蓝色)酪氨酸SP 606和反之亦然的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表达显露来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)串联，看显露直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自快速的发展的CD4+ treg细胞膜控制振荡CD4+T细胞膜的潜能降低。SP四组用蓝色的终点站和左上角透露，HD四组用蓝色的终点站和左上角透露，橘色的终点站/左上角透露酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按观察的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，指导3在此之后进行流式细胞膜术测定。(a-d)与CD4+；也者相对应的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百份。用到中性对照(酪氨酸的响应细胞膜不含treg)推算消除百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 振荡CD4+T细胞膜对快速的发展的T细胞膜再生的消除更敏感。SP四组用蓝色的终点站和左上角透露，HD四组用蓝色的终点站和左上角透露，橘色的终点站/左上角透露酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按观察的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，指导3在此之后进行流式细胞膜术(CD25反染)和细胞膜因次子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同指导。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除百分率(b)。(c,d) CD25消除百分率(c)和CD134消除百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的表达显露来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们得显露的假设是，来自快速的发展次子的再生无意识CD4+Treg在GITR表达显露来当中得到了扩张和丰富，强调了进一步科学研究Treg在1DF高血压安全性个体当中的一般而言的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28